ለአር ኤን ኤ ለመለየት የ RT-PCR ምላሽን ስሜት እንዴት ማሻሻል እንደሚቻል

በጄኔቲክ ጥናቶች ሂደት ውስጥ ብዙ ጊዜ በቂ ያልሆነ የአር ኤን ኤ ናሙናዎች ያጋጥሙናል, ለምሳሌ ጥቃቅን የአናቶሚክ የአፍ እጢዎች, ነጠላ ሴል ናሙናዎች እንኳን, እና በሰዎች ሴሎች ውስጥ በጣም ዝቅተኛ በሆነ ደረጃ የተገለበጡ ልዩ የጂን ሚውቴሽን ናሙናዎች.በእርግጥ ለኮቪድ-19 ምርመራ፣ ስዋቦዎቹ በትክክለኛው ቦታ ላይ ካልሆኑ ወይም በናሙና ወቅት በቂ ጊዜ ከሌለ የናሙና መጠኑ በጣም ዝቅተኛ ይሆናል፣ ለዚህም ነው የጤና እና የቤተሰብ ምጣኔ ኮሚሽን ከሁለት ቀናት በፊት የወጣው እና ፈተናውን አልፏል, እና የኒውክሊክ አሲድ ናሙና ስድስት ናሙናዎችን ካልወሰደ, ሪፖርት ማድረግ ይችላሉ.

የ reagen ትብነት አስፈላጊ ነው ምክንያቱም ይህ ችግር ወይም ያ ችግር ስላለብን ስለዚህ የ RT-PCR ን ስሜትን ለማሻሻል ምን ማድረግ እንችላለን?

መፍትሄዎችን ከመወያየታችን በፊት፣ ከላይ ከጠቀስነው ሁኔታ ጋር ሁለት ትልቅ ውስብስቦችን እንጥቀስ።

በመጀመሪያ ደረጃ፣ በአር ኤን ኤ መጥፋት ላይ የምንጨነቀው በናሙና ውስጥ ጥቂት የሕዋስ ሰዎች ብቻ ሲኖረን ነው።እንደ አምድ ዘዴ ወይም ኑክሊክ አሲድ የዝናብ ዘዴን የመሳሰሉ ባህላዊ መለያየት እና የጽዳት ዘዴዎች ጥቅም ላይ ከዋሉ ጥቂቶቹ ናሙናዎች የመጥፋት እድሉ ከፍተኛ ነው።አንዱ መፍትሔ እንደ tRNA ያለ ድምጸ ተያያዥ ሞለኪውል መጨመር ነው፣ ነገር ግን አሁንም ቢሆን፣ የማገገም ሙከራችን ደህና ስለመሆኑ ምንም ዋስትና የለም።

ታዲያ ምን ይሻላል?ለባህላዊ ሴሎች ወይም ማይክሮአናቶሚካል ናሙናዎች ጥሩ አማራጭ ቀጥተኛ ሊሲስ መጠቀም ነው.

ሀሳቡ ሴሎቹን ለ 5 ደቂቃዎች በመከፋፈል አር ኤን ኤውን ወደ መፍትሄው ይልቀቁ ፣ ከዚያ ለ 2 ደቂቃዎች ምላሹን ያቁሙ ፣ ከዚያ lysate በቀጥታ ወደ በግልባጭ የጽሑፍ ምላሽ ላይ በመጨመር ምንም አር ኤን ኤ እንዳይጠፋ እና በመጨረሻም የተገኘውን ሲዲኤን በቀጥታ ያስቀምጡ። ወደ እውነተኛ ጊዜ ምላሽ.

ነገር ግን በተወሰነ የመነሻ ነጥብ ወይም በትንሽ ኢላማ የጂን አገላለጽ ምክንያት ሁሉንም አር ኤን ኤ እንደገና ጥቅም ላይ ማዋል የምንችል ከሆነ እና ጥሩ የአሁናዊ ምልክት ለማግኘት በቂ አብነቶችን ካላቀረብንስ?

በዚህ ሁኔታ, የቅድመ-ማጉላት ደረጃ በጣም ጠቃሚ ሊሆን ይችላል.

ከታች ከተገለበጠ በኋላ ስሜታዊነትን ለመጨመር እቅድ ነው.ከመጀመራችን በፊት፣ ለቅድመ-ማጉላት ለእነዚህ ዒላማዎች የተወሰኑ ፕሪመርሮችን ለመንደፍ፣ የትኞቹን ኢላማዎች እንደምንፈልግ መጠየቅ አለብን።

ይህ እስከ 100 ጥንድ ፕሪመር እና ከ 10 እስከ 14 ጊዜ የምላሽ ዑደት ያለው ድብልቅ ፕሪመር በመፍጠር ማግኘት ይቻላል.ስለዚህ፣ የተገኘውን ሲዲኤን ቀድሞ ለማጉላት በተለይ ለዚህ መስፈርት የተነደፈ Master Mix ያስፈልጋል።

የዑደቶችን ቁጥር በ10 እና 14 መካከል ለማስቀመጥ ምክንያት የሆነው ይህ የተገደበ ቁጥር በተለያዩ ዒላማዎች መካከል የዘፈቀደ መሆኑን ያረጋግጣል፣ ይህም መጠናዊ ሞለኪውላዊ መረጃ ለሚፈልጉ ተመራማሪዎች ወሳኝ ነው።

ከቅድመ-ማጉላት በኋላ, ከፍተኛ መጠን ያለው ሲዲኤን ማግኘት እንችላለን, ስለዚህም በኋለኛው ጫፍ ላይ ያለው የመለየት ስሜት በእጅጉ ይሻሻላል, እና ናሙናውን እንኳን በማጥፋት እና ሊከሰቱ የሚችሉ የዘፈቀደ ስህተቶችን ለማስወገድ ብዙ የእውነተኛ ጊዜ PCR ምላሾችን ማከናወን እንችላለን.